Descoperă tot ce trebuie să știi despre analiza cromozomilor în lichid amniotic - proceduri, rezultate și importanță

Principiul analizei cromozomilor din lichid amniotic constă în cultivarea amniocitelor fetale pentru obținerea de cromozomi și blocarea diviziunii celulelor în etapa de metafază a mitozei. Principalul scop este identificarea anomaliilor cromozomiale prin citogenetică clasică, oferind informații despre structura și numărul cromozomilor copiilor în sarcină.

Metode citogenetice utilizate în diagnostic prenatal

Principiul analizei cromozomilor din sânge periferic constă în stimularea proliferării limfocitelor T cu phitohemaglutinină pentru obținerea de cromozomi și blocarea diviziunii celulelor în etapa de metafază a mitozei.

Hibridizarea fluorescent în situ (FISH) este o tehnică de citogenetică moleculară utilizată în scopul identificării anomaliilor cromozomiale, numerice și structurale (care nu pot fi determinate prin cariotipare). Principiul acestei metode constă în atașarea la secvența-țintă a unei sonde de ADN monocatenar (de circa 40 kb), marcată fluorescent, pe baza complementarității, de o secvență-țintă a unui cromozom. Hibridizarea sondei cu ADN-ul celular este vizualizată la microscopul cu fluorescent echipat cu filtre de excitație și emisie, ceea ce permite citirea semnalelor zonei țintă. Sonda pentru gena SRY, marcată cu roșu, este formată din două secvențe care nu se suprapun, 30Kb și 50Kb. Secvențele acoperă întreaga genă SRY și AND-ul care o flanchează, inclusiv gena RPS4Y1.

Cariotip molecular și diagnostic postnatal

Array CGH (array-based Comparative Genomic Hybridization) reprezintă cariotipul molecular pentru diagnostic postnatal, folosind evaluarea cantitativă a ADN-ului testat față de ADN-ul de referință pentru identificarea diferențelor în copy number.

Principiul metodei PCR multiplex cu primers biotinilați, urmat de revers-hibridizare pe stripuri, permite detectarea a 38 de mutații din gena CFTR printr-o serie de sonde oligonucleotidice fixate pe membrane. De asemenea, ADN-ul genomic izolat din sânge venos este analizat prin PCR multiplex pentru regiuni de interes AZF, în contextul diagnosticului genetic relevant pentru fertilitate.

Context reproducere - fertilizare in vitro și diagnostice prenatale

Dezvoltarea tehnicilor de fertilizare in vitro și diagnostic prenatal este însoțită de o estimare conform căreia anomalii genetice apar la până la 30% dintre cupluri afectate de infertilitate. În investigarea infertilității, cariotipul de cuplu joacă un rol esențial pentru identificarea eventualelor anomalii cromozomiale care pot afecta fertilitatea, embrionul și sarcina.

Tipuri de teste prenatale

Testele prenatale pot fi împărțite în screening prenatal și teste de diagnostic. Screening-ul prenatal nu confirmă diagnosticul, ci oferă riscul unui făt pentru anumite malformații congenitale. Dublu test/triplu test sunt utilizate în trimestrele I și II, iar diagnosticul confirmat poate include amniocenteza sau prelevarea vilozităților coriale. Testarea non-invazivă (NIPT) cum este VERACITY și VERAgene oferă detecții avansate pentru aneuploidii, microdeleții și posibil boli monogenice, cu utilitate în decizia informată privind continuarea sarcinii.

Veracity examinează sângele matern după săptămâna a 10-a pentru riscul de trisomii 21, 18, 13, sexul fătului și poate fi utilizat în sarcini cu risc crescut. VERAgene combină evaluarea riscului de aneuploidii/microdelețiilor cu screening-ul pentru boli monogenice, acoperind o gamă amplă de afecțiuni grave, pentru sarcini monofetale și gemelare, inclusiv FIV, începând cu 10 săptămâni de gestație.

Testarea neonatală și paneluri genetice

Synevo oferă screening neonatal 100+ pentru afecțiuni metabolice ereditare și neuroblastom, cu o rată de detecție de 99%. Panelurile genetice includ afecțiuni cardiace și aortice, aritmii, cardiomiopatii și defecte cardiace congenitale, cu utilitatea identificării riscurilor de transmitere și strategicile de management.

Proceduri practicate în cariotipul din lichid amniotic

Procedura de amniocenteză implică recoltarea de lichid amniotic sub ghidaj ecografic pentru a obține celule fetale. Procesarea la Synevo este automatizată pentru obținerea rapidă a metafazelor necesare analizei citogenetice. Durata medie de eliberare a rezultatului este de 21-28 de zile lucrătoare, în funcție de calitatea culturii și numărul de metafaze analizate.

Specimen recoltat - 20-30 mL lichid amniotic; recomandări: recoltare în condiții sterile, transport la temperatura ambientală, proba însoțită de cererea de analize. Stabilitate - maxim 72 ore până la începerea analizelor. În raportare, se discută frecvența de apariție a riscurilor de nondisjuncție și recurență, precum și recomandările pentru testele pentru părinți.

Raportarea rezultatelor poate indica trăsături tipice: trisomii viabile, aneuploidiile sexuale, sau translocații echilibrate/neechilibrate. În cazul translocațiilor neechilibrate, este recomandat să se analizeze cariotipul ambilor părinți pentru a evalua riscul de recurență în sarcinile viitoare.

Întrebări frecvente și limitări

Un cariotip normal nu exclude defecte fetale generate de anomalii citogenetice submicroscopice, mutații moleculare sau efecte teratogene. Mozaicismul cromozomal poate necesita confirmări suplimentare prin analiza citogenetică standard, iar recurența pentru anumite anomalii poate depinde de moștenire sau de de novo evenimente genetice.

Condiții și recomandări pentru amniocenteză

Indicația pentru amniocenteză se stabilește individual, după consiliere, beneficiile, limitele și riscurile procedurii. În Laboratorul de Genetică Medicală SANADOR sunt efectuate cariotip din lichid amniotic, cariotip molecular din lichid amniotic și teste rapide pentru aneuploidii. Procedura durează câteva minute, iar rezultatele pot varia în funcție de testul solicitat. Pregătirea clinică este, de regulă, simplă și recuperarea este rapidă.

Studiu statistic și frecvențe

Rata anomaliilor cromozomiale este mai mare în perioada prenatală decât la naștere, cu estimări despre 1 din 13 concepții prezentând o anomalie cromozomială, dar doar aproximativ 6 la 1000 sunt viabile. Anomaliile numerice afectează în special cromozomii 13, 18, 21, X și Y. Riscul nondisjuncției arteriale crește cu vârsta maternă, ceea ce întărește necesitatea consilierii genetice și a testelor prenatale la femeile peste 35 de ani.

Concluzie - rolul cariotipului de cuplu și al testelor prenatale în infertilitate

Analiza cariotipului de cuplu reprezintă o componentă esențială a investigației infertilității, oferind informații cruciale pentru gestionarea și tratamentul cuplurilor afectate. Rezultatele cariotipului pot clarifica posibile cauze ale infertilității sau ale pierderilor de sarcină, iar consilierea genetică poate ghida deciziile privind viitoarele sarcini.